激光共聚焦显微镜

内容简介

激光共聚焦简介

Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测，来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上，该点所发射的荧光成像在探测针孔上，该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的，因此被探测点即共焦点，被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上，为了产生一幅完整的图像，由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描，从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动，将样品新的一个层面移动到共焦平面上，样品的新层面又成像在显示器上，随着Z轴的不断移动，就可得到样品不同层面连续的光切图像 。

样品处理步骤

可以直接拍摄也可以委托做前处理，请指出前处理方案和步骤，以免疫荧光前处理为列（平台也可以委托购买试剂盒和细胞等生物材料）：

前处理方法（免疫荧光）
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；
3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min（细胞膜上表达的抗原省略此步骤）；
4. PBS浸洗玻片3次，每次3 min，吸水纸吸干PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温封闭30min；
5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒，4℃孵育过夜；
6. 加荧光二抗： PBST 浸洗爬片3次，每次3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中20-37℃孵育1h，PBST浸洗切片3次，每次3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；

8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在激光共聚焦下观察采集图像。

结果展示

I:面筋提取物颗粒染色拍照；II：乳胶颗粒染色拍照；III：生物膜细菌的死活分布3D图；IV:细胞死活染色拍照；V：细胞内线粒体定位；VI: 鬼笔环肽细胞骨架染色；VII: 组织免疫荧光（组织内蛋白定位）；VIII:细胞内荧光探针成像；IX：细胞免疫荧光。

服务说明

根据客户的实验目的和要求设计激光共聚焦实验前处理，以及激光共聚焦拍摄服务。

需要您提供：

1.直接拍摄的片子（直接上机拍摄）。

2.原材料（含前处理方案+制片信息）。

平面模式拍摄5-6个视野，3D模式拍摄2-3个视野。